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Andreas Rinne

• RNA interference (RNAi) by short double-stranded RNA (siRNA) represents a frequently used technique for gene silencing to study gene function. Thus far, successful application of RNAi in highly differentiated cells \(\textit {in vitro}\) is sparse. This work demonstrates feasibility of RNAi in highly differentiated, postmitotic cardiac myocytes using adenovirus-driven transcription of siRNA hairpins under murine U6 promoter control. Efficient knockdown (> 90%) of a transgene (EGFP) or an endogenous gene encoding for Kir2.1, a subunit of an inward-rectifier channel that contributes to the current I\(_{K1}\), was demonstrated \(\textit {in vitro}\) within 6 to 8 days. Suppression of I\(_{K1}\) caused a depolarization of the membrane potential and generated, in a fraction of cells, a pacemaker-like phenotype. Moreover, ablation of I\(_{K1}\) was paralleled by an increase in amplitude of I\(_{K(ACh)}\). Evidence could be provided that this interference between K\(_{ir}\) channels is due to current-dependent K\(^{+}\)-accumulation/depletion.
• RNA Interferenz stellt eine weit verbreitete Methode zur funktionellen Charakterisierung von Genen dar, die jedoch an ausdifferenzierten Zellen nur unzureichend etabliert ist. Die vorliegende Arbeit beschreibt RNA Interferenz an ausdifferenzierten, postmitotischen Herzmuskelzellen unter Verwendung adeno-viraler Vektoren, die, unter Kontrolle des murinen U6 Promoters, eine Transkription von endogenen siRNAs vermitteln. Die effiziente Inaktivierung (> 90 %) eines Transgens (EGFP) sowie eines Gens, das für die endogene Untereinheit Kir2.1 eines einwärts gleichrichtenden Ionenkanals (I\(_{K1}\)) kodiert, erfolgte innerhalb von 6 bis 8 Tagen. Die Verminderung des Stromes I\(_{K1}\) führte zu einer Depolarisation des Membranruhepotentials sowie in einigen Zellen zu einem Schrittmacher-ähnlichen Phänotyp. Weiterhin führte die Reduktion des Hintergrundstromes I\(_{K1}\) zu einer Zunahme des muskarinergen Stromes I\(_{K(ACh)}\) , anhand derer der Nachweis einer stromabhängigen Interaktion nativer K\(_{ir}\)-Kanäle gezeigt wurde.