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Ilona Szivák

• The present study reports about the generation of polyclonal antibodies, which immune-react specifically with the PI4K92 phosphorylated at different Serine and Threonine residues (Ser294; Ser496 and Thr504). Utilizing these phospho-specific antibodies, it was established that when PI4K92 is phosphorylated on Ser294 it localizes exclusively in the Golgi apparatus, while when phosphorylated on Ser496 or Thr504, it accumulates in the nuclear speckles. The association of phosphorylated PI4K92 to the nuclear speckles is dynamic and follows the morphological alteration of speckles during inhibition of mRNA transcription with \(\alpha\)-amanitin. The Ser294, Ser496 and Thr504 phosphorylation increases the lipid kinase activity. The generation of different phosphorylation mutants of PI4K92 and inhibition studies on nuclear export indicates that phosphorylation has no effect on the nuclear shuttling. The nucleo-cytoplasmic transport of PI4K92 can be saturated.
• In dieser Arbeit wird die Herstellung polyklonaler Antikörpern vorgestellt, die spezifisch mit phosphorylierter PI4K92 an verschiedenen Serin- und Threonin- Resten immuno-reagieren (Ser294; Ser496 und Thr504). Durch Benutzung dieser phosphospezifischen Antikörper wurde festgestellt, dass an Ser294 phosphorylierte PI4K92 sich exklusiv im Golgi-Apparat befindet. An Ser496 oder Thr504 phosphorylierte PI4K92 findet sich dagegen ausschießlich in speziellen organellen des Zellkerns, den "Speckles". Die Verbindung der phosphorylierten PI4K92 zu den "Speckles" ist dynamisch und folgt bei Hemmung der mRNA-Transkription mit \(\alpha\)-Amanitin den morphologischen Änderungen der "Speckles". Die Ser294- Ser496- und Thr504-Phosphorylierung erhöht die Lipid-Kinase-Aktivität. Die Herstellung von verschiedenen Phosphorylierungs-Mutanten von PI4K92 und Experimente den Zellkern-Export zu hemmen zeigen, dass die Phosphorylierung keine Auswirkung auf den Zellkerntransport der PI4K92 hat.